PRMT2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405107-ACT

PRMT2 (protein arginine methyltransferase 2) è un enzima umano SAM-dipendente che catalizza la metilazione dell’arginina su substrati istonici e non istonici, modellando l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. Attraverso la modulazione delle interazioni proteina–proteina e della segnalazione epigenetica, PRMT2 influenza processi che includono la regolazione trascrizionale, il processamento dell’RNA e il controllo del ciclo cellulare. L’attività di PRMT2 interseca programmi trascrizionali dei recettori nucleari e dell’infiammazione, collegandone la regolazione a vie che governano la differenziazione cellulare e le risposte allo stress. Un’alterata espressione di PRMT2 o una segnalazione dipendente dalla metilazione è stata associata a stati di espressione genica deregolati osservati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto del suo studio in ricerche meccanicistiche e focalizzate sulle vie di segnalazione.

PRMT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRMT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRMT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRMT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRMT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRMT2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRMT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRMT2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRMT2 nelle cellule tumorali con espressione di PRMT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.