POU2F3 Plasmide Double Nickase (h): sc-417495-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- POU2F3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il POU2F3 Double Nickase Plasmid (h) e il POU2F3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POU2F3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: POU2F3 Antibody (6D1): sc-293402
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
POU2F3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417495-NIC | 20 µg | $410.00 |
POU2F3 codifica un fattore di trascrizione con dominio POU che dirige programmi di espressione genica specifici di linea nelle cellule epiteliali, con ruoli di primo piano nella differenziazione e nel mantenimento dell’identità delle cellule tuft/chemosensoriali. Legandosi a motivi octamerici e coordinando reti trascrizionali, POU2F3 influenza lo stato della cromatina e i percorsi a valle che controllano le decisioni di destino cellulare, le funzioni associate alla barriera e la segnalazione responsiva allo stress. Un’espressione deregolata di POU2F3 è stata collegata ad alterati stati di differenziazione epiteliale ed è frequentemente studiata nel contesto della plasticità di linea e della riprogrammazione trascrizionale in biologia del cancro. In quanto regolatore maestro, rappresenta un nodo utile per analizzare come i fattori di trascrizione plasmino l’identità cellulare e output di segnalazione dipendenti dal contesto.
POU2F3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POU2F3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POU2F3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POU2F3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POU2F3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.