PLSCR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402203-ACT

La PLSCR1 umana (fosfolipide scramblasi 1) è una proteina associata alla membrana inducibile dall’interferone, implicata nella traslocazione bidirezionale dei fosfolipidi, nel rimodellamento della membrana plasmatica e nella regolazione dell’esposizione della fosfatidilserina sulla superficie cellulare durante le risposte allo stress. Oltre alla dinamica lipidica, PLSCR1 è stata collegata alla segnalazione dell’immunità innata e a programmi trascrizionali a valle delle vie interferone/JAK–STAT, influenzando le risposte antivirali e il controllo della crescita cellulare. Un’alterata espressione di PLSCR1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e stati infiammatori, rendendola un nodo utile per studiare i meccanismi che collegano l’organizzazione della membrana, la segnalazione delle citochine e fenotipi mediati dal sistema immunitario. La sua ampia localizzazione subcellulare e la connettività con diverse vie di segnalazione ne supportano l’impiego per analizzare la trasduzione del segnale, le modificazioni di membrana associate all’apoptosi e le reti di risposta ospite–patogeno.

PLSCR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLSCR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PLSCR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLSCR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLSCR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PLSCR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLSCR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PLSCR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PLSCR1 nelle cellule tumorali con espressione di PLSCR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.