Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLSCR1: sc-402203-ACT

La PLSCR1 humaine (phospholipid scramblase 1) est une protéine associée aux membranes, inductible par l’interféron, impliquée dans la translocation bidirectionnelle des phospholipides, le remodelage de la membrane plasmique et la régulation de l’exposition de la phosphatidylsérine à la surface cellulaire lors des réponses au stress. Au-delà de la dynamique lipidique, PLSCR1 a été associée à la signalisation immunitaire innée et à des programmes transcriptionnels en aval des voies interféron/JAK–STAT, influençant les réponses antivirales et le contrôle de la croissance cellulaire. Des altérations de l’expression de PLSCR1 ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux et états inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les mécanismes reliant l’organisation membranaire, la signalisation des cytokines et des phénotypes médiés par le système immunitaire. Sa large localisation subcellulaire et sa connectivité au sein de plusieurs voies soutiennent des applications visant à disséquer la transduction du signal, les modifications membranaires liées à l’apoptose et les réseaux de réponse hôte–pathogène.

PLSCR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLSCR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLSCR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLSCR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLSCR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLSCR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLSCR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLSCR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLSCR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLSCR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.