Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) PKM: sc-400834-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PKM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PKM Double Nickase (h) et le plasmide PKM Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PKM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKM Antibody (C-11): sc-365684
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PKM | sc-400834-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PKM | sc-400834-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PKM code la pyruvate kinase M, une enzyme glycolytique limitante qui catalyse la conversion du phosphoénolpyruvate en pyruvate avec production concomitante d’ATP, couplant ainsi le catabolisme du glucose à l’équilibre énergétique cellulaire. Des isoformes alternatives (PKM1/PKM2) soutiennent des états métaboliques distincts, PKM2 permettant de détourner des intermédiaires de la glycolyse vers des voies anaboliques qui maintiennent la production de biomasse et l’homéostasie rédox. L’activité de PKM s’inscrit à l’interface du métabolisme central du carbone, notamment la voie des pentoses phosphates et la production de lactate, modulant la détection des nutriments et les réponses au stress. Une expression dérégulée de PKM ou une utilisation anormale des isoformes est fréquemment étudiée dans des contextes de reprogrammation métabolique, de prolifération et de bioénergétique altérée, dans divers modèles de maladie.
PKM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PKM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PKM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PKM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PKM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.