Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PKM Plasmide Double Nickase (h): sc-400834-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PKM Double Nickase Plasmid (h) e il PKM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PKM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKM Antibody (C-11): sc-365684
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKM Plasmide Double Nickase (h) | sc-400834-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400834-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PKM codifica la piruvato chinasi M, un enzima glicolitico limitante la velocità che catalizza la conversione del fosfoenolpiruvato in piruvato con concomitante produzione di ATP, accoppiando così il catabolismo del glucosio al bilancio energetico cellulare. Isoforme alternative (PKM1/PKM2) supportano stati metabolici distinti: PKM2 consente la deviazione degli intermedi glicolitici verso vie anaboliche che sostengono la produzione di biomassa e l’omeostasi redox. L’attività di PKM si integra con il metabolismo centrale del carbonio, inclusi la via dei pentoso fosfati e la produzione di lattato, modulando la percezione dei nutrienti e le risposte allo stress. Un’espressione di PKM deregolata o un uso alterato delle isoforme è spesso oggetto di studio in contesti di riprogrammazione metabolica, proliferazione e bioenergetica modificata in diversi modelli di malattia.
PKM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PKM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PKM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PKM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PKM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.