PIEZO1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410555-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PIEZO1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PIEZO1 Double Nickase Plasmid (h) e il PIEZO1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PIEZO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PIEZO1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PIEZO1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIEZO1 codifica un canale cationico meccanosensibile e non selettivo che converte la tensione di membrana e lo stress da taglio in un afflusso di Ca²⁺, consentendo alle cellule di percepire e rispondere a stimoli meccanici. L’attività di PIEZO1 regola processi che includono il controllo del volume cellulare, l’omeostasi ionica, il rimodellamento del citoscheletro e vie di meccanotrasduzione che influenzano migrazione, adesione e segnalazione endoteliale. In contesti ematologici e vascolari, la segnalazione di Ca²⁺ mediata da PIEZO1 contribuisce all’idratazione e alla deformabilità dei globuli rossi e alle risposte dipendenti dal flusso nelle cellule endoteliali. Alterazioni genetiche e funzionali di PIEZO1 sono state associate a disturbi della fisiologia eritrocitaria e dello sviluppo linfatico/vascolare, rendendolo un bersaglio rilevante per analizzare le reti di segnalazione regolate da stimoli meccanici.
PIEZO1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIEZO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIEZO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIEZO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIEZO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.