PI 3-kinase p85α Plasmide Double Nickase (h): sc-400224-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PI 3-kinase p85α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h) e il PI 3-kinase p85α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PIK3R1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PI 3-kinase p85α Antibody (B-9): sc-1637
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PI 3-kinase p85α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p85α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3R1 codifica la subunità regolatoria p85α della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IA, un adattatore chiave che stabilizza e recluta le subunità catalitiche p110 verso le tirosin-chinasi recettoriali attivate e le proteine IRS. Collegando la segnalazione a monte dei fattori di crescita alla produzione di PIP3, la PI3K p85α controlla AKT–mTOR e vie correlate che regolano sopravvivenza cellulare, proliferazione, metabolismo e la regolazione a feedback della segnalazione insulinica. p85α influenza anche l’assemblaggio dei complessi di segnalazione tramite il legame delle SH2 ai residui di fosfotirosina e contribuisce al crosstalk con MAPK e altre reti di risposta allo stress. Alterazioni della funzione di PIK3R1 e la disregolazione della via sono associate a stati di segnalazione oncogenici e a fenotipi metabolici, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sul controllo della via PI3K.
PI 3-kinase p85α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIK3R1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIK3R1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIK3R1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIK3R1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.