Plásmido Doble Nickase (h) PI 3-kinase p85α: sc-400224-NIC

PIK3R1 codifica la subunidad reguladora p85α de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) de clase IA, un adaptador clave que estabiliza y recluta las subunidades catalíticas p110 hacia receptores tirosina-quinasa activados y proteínas IRS. Al acoplar la señalización ascendente de factores de crecimiento con la producción de PIP3, la PI3K p85α controla AKT–mTOR y otras vías relacionadas que gobiernan la supervivencia, la proliferación y el metabolismo celulares, así como la regulación por retroalimentación de la señalización de la insulina. p85α también influye en el ensamblaje de complejos de señalización mediante la unión a fosfotirosinas mediada por dominios SH2 y contribuye al crosstalk con MAPK y otras redes de respuesta al estrés. Las alteraciones en la función de PIK3R1 y la desregulación de esta vía se asocian con estados de señalización oncogénica y fenotipos metabólicos, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos del control de la vía PI3K.

PI 3-kinase p85α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIK3R1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIK3R1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIK3R1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIK3R1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.