Peg1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410884-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Peg1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Peg1 Double Nickase Plasmid (h) e il Peg1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MEST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Peg1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410884-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Peg1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410884-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MEST codifica la proteina Peg1 (paternally expressed gene 1), un fattore regolato durante lo sviluppo e implicato nel controllo della crescita embrionale e nella biologia delle linee mesenchimali. Peg1 è associata alla regolazione epigenetica dei loci sottoposti a imprinting ed è spesso studiata nel contesto della metilazione del DNA e del mantenimento dello stato della cromatina, che influenzano le decisioni sul destino cellulare. Alterazioni dell’espressione di MEST o del suo stato di imprinting sono state correlate a programmi di differenziamento deregolati, fenotipi metabolici e rimodellamento epigenetico associato ai tumori. In quanto gene silenziato sul versante materno ed espresso da quello paterno, MEST rappresenta un modello utile per indagare gli effetti legati all’origine parentale, l’espressione allele-specifica e l’instabilità dell’imprinting in condizioni di stress cellulare o trasformazione.
Peg1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MEST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MEST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MEST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MEST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.