PD-ECGF Plasmide Double Nickase (h): sc-403836-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PD-ECGF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h) e il PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TYMP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PD-ECGF Antibody (PGF-44C): sc-47702
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PD-ECGF Plasmide Double Nickase (h) | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PD-ECGF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **TYMP** codifica la timidina fosforilasi, nota anche come fattore di crescita delle cellule endoteliali derivato dalle piastrine (**PD-ECGF**), un enzima citosolico che catalizza la fosforolisi della timidina e della deossiuridina in timina/uracile e 2-desossiribosio-1-fosfato, contribuendo così a modulare la via di recupero dei nucleotidi e l’equilibrio intracellulare dei dNTP. Influenzando la disponibilità dei nucleosidi e il metabolismo dei fosfati del desossiribosio, PD-ECGF collega il catabolismo delle pirimidine alle risposte allo stress da replicazione del DNA, all’omeostasi dei nucleotidi mitocondriali e a programmi cellulari sensibili allo stato redox. Un’alterata attività di TYMP è implicata nella patobiologia dell’encefalomiopatia neurogastrointestinale mitocondriale (**MNGIE**) ed è stata studiata in contesti in cui il metabolismo dei nucleosidi interseca la segnalazione angiogenica e l’adattamento del microambiente tumorale. Queste caratteristiche rendono TYMP un bersaglio utile per studi meccanicistici sul flusso dei nucleosidi, sulla stabilità del genoma e su fenotipi associati al metabolismo nelle cellule umane.
PD-ECGF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TYMP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TYMP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TYMP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TYMP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.