PCAF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400753-ACT

KAT2B codifica PCAF, un’istone acetiltransferasi della famiglia GNAT che acetila istoni e substrati non istonici per modulare l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. PCAF opera in complessi coattivatori multiproteici e interagisce con fattori di trascrizione per regolare processi che includono la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e i programmi di differenziamento. Attraverso un controllo dell’espressione genica dipendente dall’acetilazione, KAT2B/PCAF contribuisce a vie associate alla segnalazione infiammatoria e a reti trascrizionali oncogeniche. Un’attività o un’espressione di PCAF deregolate sono state associate a stati epigenetici alterati osservati in molteplici contesti tumorali e in altre patologie caratterizzate da squilibri trascrizionali.

PCAF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KAT2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PCAF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KAT2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KAT2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PCAF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KAT2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PCAF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PCAF nelle cellule tumorali con espressione di KAT2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.