Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Paf1 Plasmide Double Nickase (h): sc-417797-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Paf1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Paf1 Double Nickase Plasmid (h) e il Paf1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PAF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Paf1 Antibody (E-7): sc-514491
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Paf1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417797-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **PAF1** codifica Paf1, un componente centrale del complesso **PAF1** associato all’RNA polimerasi II, che coordina l’allungamento della trascrizione con la regolazione della cromatina co-trascrizionale. Attraverso interazioni con fattori di elongazione e con i macchinari di modifica degli istoni, Paf1 contribuisce a regolare la monoubiquitinazione di H2B e la successiva metilazione di H3K4/H3K79, collegando l’espressione genica allo stato epigenetico. Il complesso PAF1 contribuisce inoltre al processamento dell’RNA e alla stabilità del genoma, includendo ruoli nei conflitti replicazione–trascrizione e nelle risposte al danno al DNA. Un’attività deregolata del complesso PAF1 è stata associata a programmi trascrizionali alterati osservati in molteplici tumori e in altri contesti cellulari proliferativi o legati allo stress, rendendo PAF1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla trascrizione e sulla dinamica della cromatina.
Paf1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.