p73 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416822-ACT

Il gene umano **TP73** codifica per **p73**, un fattore di trascrizione della famiglia di p53 che regola decisioni sul destino cellulare, inclusi arresto del ciclo cellulare, apoptosi, differenziamento e senescenza. Attraverso una transattivazione dei geni bersaglio dipendente dal contesto, p73 integra le risposte allo stress e influenza la segnalazione del danno al DNA, i programmi di apoptosi mitocondriale e le vie di sviluppo. La diversità di isoforme (TAp73 e ΔNp73) può spostare gli output trascrizionali verso stati pro-apoptotici o pro-sopravvivenza, contribuendo all’integrità epiteliale e allo sviluppo neuronale. L’attività deregolata di TP73 e un alterato bilanciamento tra isoforme sono spesso oggetto di studio in oncologia, nei disturbi del neurosviluppo e nei meccanismi di chemioresistenza, poiché modulano le reti trascrizionali e la stabilità genomica.

p73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TP73 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TP73 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TP73, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p73. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TP73 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p73 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p73 nelle cellule tumorali con espressione di TP73 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.