P2Y9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429620

Panoramica

Lpar4 codifica il recettore purinergico P2Y9, un recettore accoppiato a proteine G implicato nella segnalazione mediata da nucleotidi/lipidi extracellulari, che influenza la comunicazione cellulare, le cascate di secondi messaggeri prossimali alla membrana e la regolazione, dipendente dal contesto, della motilità e della differenziazione. Nei sistemi murini, la segnalazione della famiglia P2Y converge comunemente su vie che controllano la dinamica del calcio intracellulare, l’equilibrio dell’AMPc e le reti di chinasi a valle che coordinano il rimodellamento del citoscheletro e le risposte trascrizionali. L’attività di Lpar4/P2Y9 è quindi rilevante per studi sul traffico delle cellule immunitarie, sul crosstalk stroma–epitelio e sull’omeostasi tissutale. La deregolazione della segnalazione purinergica guidata da GPCR è stata associata a fenotipi infiammatori e fibrotici, oltre che a un’alterata segnalazione di crescita, rendendo Lpar4 un nodo utile per l’interrogazione meccanicistica delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lpar4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lpar4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lpar4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lpar4 per lo studio della segnalazione di P2Y9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lpar4 critici per la funzione di P2Y9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lpar4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal P2Y9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lpar4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR P2Y9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lpar4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lpar4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.