P2Y12 Plasmide Double Nickase (m): sc-427818-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y12 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y12 Double Nickase Plasmid (m) e il P2Y12 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2ry12. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y12 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y12 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-427818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino P2ry12 codifica per il recettore purinergico P2Y12, un GPCR accoppiato a Gi che rileva l’ADP extracellulare per sopprimere la segnalazione mediata da cAMP e coordinare le risposte a valle PI3K–Akt e MAPK. Nel sistema nervoso centrale, P2Y12 è fortemente arricchito nella microglia, dove regola la motilità dei prolungamenti, la chemiotassi e i comportamenti di sorveglianza in risposta a segnali purinergici rilasciati da cellule stressate o danneggiate. La segnalazione dipendente da P2Y12 influenza la comunicazione neuro-immune, il rimodellamento sinaptico e il tono infiammatorio, rendendo P2ry12 un marcatore molecolare ampiamente utilizzato e un nodo funzionale nella biologia della microglia. Una segnalazione purinergica deregolata attraverso P2Y12 è stata associata ad alterazioni degli stati di attivazione microgliale in modelli di neuroinfiammazione e neurodegenerazione.
P2Y12 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2ry12 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2ry12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2ry12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2ry12 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.