Oxytocin-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400641-ACT

Il gene umano **OXTR** codifica per il recettore dell’ossitocina (Oxytocin-R), un GPCR di classe A che si accoppia principalmente a **Gq/11** per stimolare la segnalazione **IP3/DAG** dipendente da **PLCβ**, la mobilizzazione del **Ca²⁺** intracellulare e l’attivazione di **PKC**. La segnalazione di OXTR influenza il crosstalk tra le vie **MAPK/ERK** e **PI3K-AKT**, plasmando programmi trascrizionali che regolano la contrattilità della muscolatura liscia, la cognizione sociale, la reattività allo stress e la comunicazione neuroendocrina. Nei tessuti periferici, OXTR contribuisce alla fisiologia dell’utero e della ghiandola mammaria, mentre nel SNC modula la plasticità sinaptica e i comportamenti a livello di circuito. Un’espressione o una segnalazione di OXTR deregolate sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici, inclusi tratti correlati allo spettro autistico, comportamenti legati all’ansia e un attaccamento sociale alterato, supportando studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti.

Oxytocin-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OXTR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Oxytocin-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OXTR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OXTR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Oxytocin-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OXTR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Oxytocin-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Oxytocin-R nelle cellule tumorali con espressione di OXTR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.