NPY2-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417895-ACT

NPY2R codifica il recettore umano del neuropeptide Y di tipo Y2 (NPY2-R), un GPCR accoppiato a Gi/o che lega il neuropeptide Y e il peptide YY per modulare la segnalazione del cAMP, l’attività dei canali ionici e la dinamica a valle della via MAPK/ERK. NPY2-R è ampiamente coinvolto nella regolazione neuroendocrina, contribuendo a plasmare la trasmissione sinaptica, la risposta allo stress e i circuiti legati all’appetito, e partecipa anche alla fisiologia vascolare e gastrointestinale. Attraverso la neurotrasmissione inibitoria e il controllo presinaptico del rilascio di peptidi, NPY2R influenza l’eccitabilità cellulare e l’omeostasi metabolica. Una segnalazione NPY2R deregolata è stata associata a fenotipi rilevanti per l’equilibrio energetico, i circuiti dell’umore e dello stress e processi infiammatori o autonomici, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli cellulari neuronali e periferici.

NPY2-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPY2R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NPY2-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPY2R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPY2R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NPY2-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPY2R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NPY2-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NPY2-R nelle cellule tumorali con espressione di NPY2R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.