Notch 4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421934

Panoramica

Notch4 codifica un recettore transmembrana a singolo passaggio della famiglia Notch che media una segnalazione dipendente dal contatto, controllando le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione. In seguito al legame con i ligandi Delta-like o Jagged, la proteolisi del recettore rilascia il dominio intracellulare di Notch, che regola programmi trascrizionali in coordinamento con RBPJ/CSL e co-attivatori. Nei tessuti murini, Notch4 è fortemente associato alla biologia vascolare ed endoteliale, influenzando il comportamento angiogenico e la maturazione dei vasi attraverso un crosstalk con vie di segnalazione quali VEGF, Wnt e TGF-β. Una segnalazione di Notch4 deregolata è stata associata a un rimodellamento vascolare aberrante e all’angiogenesi associata ai tumori, rendendola rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione nello sviluppo e nelle patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Notch 4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Notch4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Notch4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Notch4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Notch 4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Notch4 per lo studio della segnalazione di Notch 4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Notch4 critici per la funzione di Notch 4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Notch4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Notch 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Notch 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Notch4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Notch 4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Notch 4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Notch4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Notch4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.