Notch 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421933

Panoramica

Notch3 codifica il recettore Notch 3, una proteina transmembrana a singolo passaggio che media la segnalazione juxtacrina per controllare, in modo dipendente dal contesto, le decisioni sul destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione. In seguito al legame con il ligando, il processamento del recettore consente il rilascio del dominio intracellulare di Notch, che trasloca nel nucleo e regola programmi trascrizionali insieme a CSL/RBPJ e co-attivatori. Nei tessuti murini, Notch3 è fortemente associato alla biologia della muscolatura liscia vascolare e dei periciti e contribuisce alla maturazione dei vasi, all’omeostasi tissutale e alle risposte allo stress. Una segnalazione Notch3 deregolata è stata associata a stati di differenziazione aberranti e a patologie vascolari, rendendolo un nodo rilevante per lo studio del crosstalk della via Notch e del controllo del destino di linea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Notch 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Notch3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Notch3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Notch3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Notch 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Notch3 per lo studio della segnalazione di Notch 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Notch3 critici per la funzione di Notch 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Notch3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Notch 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Notch 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Notch3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Notch 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Notch 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Notch3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Notch3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.