Notch 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421933

Descripción general

Notch3 codifica el receptor Notch 3, una proteína transmembrana de paso único que media la señalización yuxtacrina para controlar, de manera dependiente del contexto, decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación. Tras la unión del ligando, el procesamiento del receptor permite la liberación del dominio intracelular de Notch, que se transloca al núcleo y regula programas transcripcionales junto con CSL/RBPJ y coactivadores. En tejidos de ratón, Notch3 está estrechamente vinculado a la biología del músculo liso vascular y de los pericitos, y contribuye a la maduración de los vasos, la homeostasis tisular y las respuestas al estrés. La señalización de Notch3 desregulada se ha asociado con estados de diferenciación aberrantes y patología vascular, lo que la convierte en un nodo relevante para estudiar la comunicación cruzada de la vía Notch y el control de linaje.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Notch 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Notch3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Notch3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Notch3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Notch 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Notch3 para la investigación de la señalización de Notch 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Notch3 críticos para la función de Notch 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Notch3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Notch 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Notch 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Notch3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Notch 3 (m) y el plásmido HDR Notch 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Notch3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Notch3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.