Nkx-2.3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406709

Panoramica

NKX2-3 codifica il fattore di trascrizione homeobox Nkx-2.3, un regolatore che si lega al DNA in modo specifico di sequenza ed è coinvolto nel patterning dello sviluppo e nelle decisioni di destino cellulare. È noto soprattutto per i suoi ruoli nei tessuti derivati dall’endoderma, inclusa l’organogenesi intestinale e splenica, dove contribuisce a coordinare programmi trascrizionali che modellano l’architettura dei tessuti. Nkx-2.3 influenza reti geniche che controllano la differenziazione epiteliale, l’identità regionale e funzioni stromali associate al sistema immunitario, collegandolo a vie che regolano l’omeostasi mucosale. Alterazioni genetiche e di espressione di NKX2-3 sono state associate alla suscettibilità alle malattie infiammatorie intestinali e alla correlata disregolazione delle interazioni immunitarie a livello intestinale, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sull’infiammazione intestinale e sulla biologia della barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NKX2-3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NKX2-3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NKX2-3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nkx-2.3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NKX2-3 per lo studio della segnalazione di Nkx-2.3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NKX2-3 critici per la funzione di Nkx-2.3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NKX2-3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nkx-2.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nkx-2.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NKX2-3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nkx-2.3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nkx-2.3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NKX2-3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NKX2-3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.