Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401605-ACT

CHRNA4 codifica la subunità α4 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), che si assemblano come canali cationici attivati da ligando e mediano la trasmissione sinaptica rapida nel sistema nervoso centrale. I recettori contenenti α4, spesso organizzati in complessi α4β2, regolano la depolarizzazione di membrana e la segnalazione calcio-dipendente che influenzano il rilascio di neurotrasmettitori, l’eccitabilità neuronale e la plasticità sinaptica. Attraverso la segnalazione colinergica, CHRNA4 contribuisce a vie che governano attenzione, vigilanza, apprendimento e circuiti legati alla ricompensa, e un’alterata funzione recettoriale è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, inclusi la suscettibilità all’epilessia e la dipendenza da nicotina. La modulazione dell’espressione di CHRNA4 è quindi rilevante per studiare la stoichiometria del recettore, la biofisica del canale e i programmi trascrizionali dipendenti dall’attività in modelli neuronali umani.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNA4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNA4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNA4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNA4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.