Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401582-NIC

CHRNA3 codifica la subunità alfa 3 del recettore nicotinico dell’acetilcolina, una componente fondamentale dei canali cationici attivati da ligando che mediano la rapida neurotrasmissione colinergica. In seguito al legame con acetilcolina o nicotina, i recettori contenenti CHRNA3 regolano la depolarizzazione di membrana e l’ingresso di Ca²⁺, accoppiandosi a segnali intracellulari che influenzano l’eccitabilità, la trasmissione sinaptica e la secrezione neuroendocrina. Nei tessuti umani, CHRNA3 è particolarmente espresso nei gangli autonomi e contribuisce a vie che controllano le funzioni cardiovascolare, gastrointestinale e respiratoria. Varianti genetiche e un’espressione deregolata nel locus CHRNA3 sono state associate alla dipendenza da nicotina e alla suscettibilità a patologie correlate al fumo, a supporto della sua utilità negli studi meccanicistici della segnalazione colinergica e della biologia della dipendenza.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.