Nek7 Plasmide Double Nickase (m): sc-425603-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nek7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nek7 Double Nickase Plasmid (m) e il Nek7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nek7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nek7 Antibody (B-5): sc-393539
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nek7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425603-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Nek7* codifica la NIMA-related kinase 7, una chinasi serina/treonina che agisce a valle di NEK9/NEK6 nel controllo della mitosi e nei processi associati al centrosoma. NEK7 contribuisce all’organizzazione dei microtubuli, all’assemblaggio del fuso e alla corretta progressione attraverso la mitosi, collegandosi così alla regolazione dei checkpoint del ciclo cellulare e alla stabilità del genoma. Oltre alla proliferazione, NEK7 è stata implicata nella segnalazione infiammatoria tramite la regolazione dell’attivazione dell’inflammasoma NLRP3, mettendo in relazione la dinamica del citoscheletro con le risposte immunitarie innate. Un’attività o un’espressione deregolate di NEK7 sono quindi rilevanti per studi su disordini proliferativi, instabilità cromosomica e fisiopatologia associata all’infiammazione nei modelli murini.
Nek7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nek7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nek7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nek7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nek7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.