Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos2 (h): sc-404123
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Nanos2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Nanos2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nanos2 Antibody (B-12): sc-393794
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos2 (h) | sc-404123 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NANOS2 code la protéine Nanos2, une protéine de liaison à l’ARN conservée au cours de l’évolution, qui agit comme régulateur post‑transcriptionnel du destin des cellules germinales. En biologie humaine, NANOS2 est associé au maintien de l’identité de la lignée germinale mâle en favorisant les programmes de différenciation des spermatogonies tout en réprimant une entrée aberrante en méiose, via le contrôle de la stabilité des ARNm et de leur traduction. Sa fonction s’inscrit à l’interface de réseaux de régulation de la lignée germinale et de processus associés aux granules d’ARN, qui façonnent le remodelage du transcriptome au cours de la gamétogenèse. Le dérèglement des voies de développement des cellules germinales impliquant les protéines de la famille NANOS est pertinent pour les études sur l’infertilité, les troubles du développement gonadique et la biologie des tumeurs germinales.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nanos2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NANOS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NANOS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NANOS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nanos2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NANOS2 pour l'étude de la signalisation de Nanos2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NANOS2 essentiels à la fonction de Nanos2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NANOS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Nanos2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nanos2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NANOS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Nanos2 plasmide HDR (h) et le Nanos2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NANOS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NANOS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.