Plasmide CRISPR d'Activation (m) NALP1A: sc-431476-ACT

Le gène murin Nlrp1a code NALP1A, un récepteur cytosolique de type NOD (NOD-like receptor) qui agit comme capteur d’inflammasome, reliant des signaux associés aux pathogènes ou au danger à l’activation de l’immunité innée. Lorsqu’il est activé, NALP1A favorise l’assemblage de complexes d’inflammasome qui entraînent l’activation de la caspase-1, conduisant à la maturation des cytokines de la famille de l’IL-1 et à des programmes de mort cellulaire inflammatoire tels que la pyroptose. Cette voie s’entrecroise avec l’amorçage via NF-κB, les réponses au stress cellulaire et la défense antimicrobienne, modulant la signalisation immunitaire des cellules myéloïdes et épithéliales. Une activité dérégulée des inflammasomes de la famille NLRP1 est impliquée dans des phénotypes inflammatoires aberrants et des lésions tissulaires d’origine immunitaire, faisant de Nlrp1a une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’inflammation stérile et des interactions hôte–pathogène dans des modèles murins.

NALP1A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nlrp1a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NALP1A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nlrp1a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nlrp1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NALP1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nlrp1a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NALP1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NALP1A dans les cellules tumorales présentant une expression de Nlrp1a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.