NALP1A Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431476-ACT

Il gene murino Nlrp1a codifica NALP1A, un recettore citosolico di tipo NOD (NOD-like) che funge da sensore dell’inflammasoma, collegando segnali associati a patogeni o a pericolo all’attivazione dell’immunità innata. Una volta attivato, NALP1A promuove l’assemblaggio di complessi dell’inflammasoma che inducono l’attivazione della caspasi-1, con conseguente processamento delle citochine della famiglia IL-1 e l’avvio di programmi di morte cellulare infiammatoria come la piroptosi. Questa via si interseca con il priming mediato da NF-κB, le risposte allo stress cellulare e la difesa antimicrobica, modulando la segnalazione immunitaria nelle cellule mieloidi ed epiteliali. Un’attività disregolata degli inflammasomi della famiglia NLRP1 è implicata in fenotipi infiammatori aberranti e in danno tissutale mediato dal sistema immunitario, rendendo Nlrp1a un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sull’infiammazione sterile e sulle interazioni ospite–patogeno in modelli murini.

NALP1A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nlrp1a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NALP1A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nlrp1a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nlrp1a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NALP1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nlrp1a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NALP1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NALP1A nelle cellule tumorali con espressione di Nlrp1a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.