NAGAT Plasmide Double Nickase (h): sc-401118-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NAGAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NAGAT Double Nickase Plasmid (h) e il NAGAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABO. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NAGAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-401118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NAGAT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABO codifica la N-acetilgalattosaminiltransferasi (NAGAT), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza il trasferimento di N-acetilgalattosamina all’antigene H per generare il determinante del gruppo sanguigno A su glicolipidi e glicoproteine. Questa attività è centrale nella glicosilazione terminale lungo la via secretoria e modella epitopi carboidratici di superficie cellulare che influenzano il traffico proteico, l’organizzazione della membrana e il riconoscimento immunitario. La variabilità genetica di ABO è alla base dei fenotipi dei gruppi sanguigni ABO ed è stata associata a differenze nella biologia dei fattori della coagulazione e nella segnalazione infiammatoria, collegando la struttura dei glicani a processi rilevanti per la malattia in contesti vascolari e immunitari. ABO/NAGAT è quindi un modello ampiamente utilizzato per analizzare come specifiche attività delle glicosiltransferasi modulino la funzione delle glicoproteine e le interazioni cellula–cellula.
NAGAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABO interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.