MYT1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407946-ACT

MYT1L codifica un fattore di trascrizione neuronale con dita di zinco che supporta i programmi di specificazione di linea e di maturazione nel sistema nervoso in sviluppo e postnatale. MYT1L modula la cromatina e le reti trascrizionali che aiutano a mantenere l’identità neuronale, reprimendo al contempo l’espressione di geni non neuronali, e influenza vie legate alla neurogenesi, alla funzione sinaptica e alla regolazione genica dipendente dall’attività. La variazione genetica e la deregolazione dell’espressione di MYT1L sono state associate a fenotipi del neurosviluppo, tra cui il disturbo dello spettro autistico, la disabilità intellettiva e tratti comportamentali correlati. In quanto regolatore dello stato trascrizionale neuronale, MYT1L è ampiamente studiato in modelli di differenziazione neuronale, riprogrammazione e sviluppo dei circuiti.

MYT1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYT1L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYT1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYT1L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYT1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYT1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYT1L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYT1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYT1L nelle cellule tumorali con espressione di MYT1L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.