Myc Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421770-ACT

Myc (c-Myc) è un fattore di trascrizione di tipo basic helix–loop–helix con motivo a cerniera di leucina che coordina ampi programmi di espressione genica controllando la crescita cellulare, l’accumulo di biomassa, la progressione del ciclo cellulare, il metabolismo e la biogenesi dei ribosomi nelle cellule di topo. Agisce a valle di vie di segnalazione mitogeniche quali Wnt/β-catenina, le tirosin-chinasi recettoriali e MAPK/PI3K, e modella la cromatina e l’allungamento trascrizionale attraverso interazioni con MAX e altri cofattori. L’attività di Myc influenza le risposte allo stress da replicazione del DNA, l’apoptosi e le decisioni di differenziamento, collegandolo alla trasformazione oncogena e al mantenimento del tumore in diversi modelli di cancro. Un’espressione disregolata di Myc è inoltre rilevante per fenotipi dello sviluppo e per paradigmi di rigenerazione tissutale in cui proliferazione e impegno di linea sono strettamente regolati.

Myc Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Myc senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myc Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Myc nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Myc, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myc. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Myc nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myc nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myc nelle cellule tumorali con espressione di Myc silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.