Mx2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400697-ACT

MX2 umano codifica la proteina di resistenza ai mixovirus 2 (Mx2), una GTPasi simile alla dinamina stimolata dagli interferoni che agisce come fattore intrinseco di restrizione antivirale. Mx2 è indotta dalla segnalazione degli interferoni di tipo I e di tipo III e opera nelle vie dell’immunità innata per limitare la replicazione di numerosi virus tramite interazioni con componenti virali e con la macchina cellulare del traffico intracellulare. Modulando i programmi trascrizionali guidati dagli interferoni e le reti di effettori antivirali, MX2 contribuisce a plasmare le difese dell’ospite e le risposte infiammatorie. Firme interferoniche deregolate e un’espressione alterata di MX2 sono state associate a stati di infezione cronica e a patologie immuno-mediate, rendendo MX2 un marker utile e un nodo meccanicistico per lo studio della biologia degli interferoni.

Mx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mx2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mx2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mx2 nelle cellule tumorali con espressione di MX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.