Munc13-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423611

Panoramica

Unc13b codifica Munc13-2, un fattore presinaptico di priming della zona attiva necessario per la maturazione delle vescicole sinaptiche in uno stato prontamente rilasciabile e per un efficiente rilascio di neurotrasmettitori evocato dal Ca²⁺. Munc13-2 coopera con i regolatori delle SNARE e con la rete RIM/Rab3 per coordinare docking, priming e plasticità a breve termine, modulando così la forza sinaptica e l’attività dei circuiti. Attraverso i suoi domini C1 e C2, Munc13-2 integra segnali dipendenti da diacilglicerolo e Ca²⁺ per regolare la probabilità di rilascio e la dinamica dei pool di vescicole. La disregolazione del priming vescicolare e della trasmissione sinaptica è ampiamente rilevante per fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, e questo motiva studi meccanicistici su Unc13b nella segnalazione neuronale e nella disfunzione delle reti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Munc13-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Unc13b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Unc13b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Unc13b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Munc13-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Unc13b per lo studio della segnalazione di Munc13-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Unc13b critici per la funzione di Munc13-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Unc13b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Munc13-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Munc13-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Unc13b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Munc13-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Munc13-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Unc13b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Unc13b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.