mTOR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425273-LAC

Mouse Mtor codifica la chinasi serina/treonina mTOR, un regolatore maestro della crescita cellulare che integra la disponibilità di amminoacidi, lo stato energetico, la tensione di ossigeno e i segnali dei fattori di crescita per coordinare programmi anabolici e catabolici. In quanto nucleo catalitico di mTORC1 e mTORC2, mTOR controlla la sintesi proteica tramite S6K e 4E-BP1, il metabolismo dei lipidi e dei nucleotidi, la soppressione dell’autofagia e l’organizzazione del citoscheletro attraverso la segnalazione Akt/SGK. La segnalazione di mTOR interagisce con le vie PI3K–Akt, AMPK, TSC1/2–Rheb e delle GTPasi Rag per bilanciare proliferazione, adattamento allo stress e omeostasi metabolica. Un’attività di mTOR deregolata è ampiamente studiata nella biologia dei tumori, nel neurosviluppo e nella plasticità sinaptica, nell’attivazione delle cellule immunitarie e nei modelli di malattie metaboliche, rappresentando un nodo centrale per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione nei sistemi murini.

Le particelle di attivazione lentivirale mTOR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mtor in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale mTOR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mtor, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di mTOR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mtor e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.