MTMR2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429507-ACT

Mtmr2 codifica MTMR2, una 3-fosfatasi dei fosfoinositidi che defosforila PI3P e PI(3,5)P2 per regolare il traffico endosomiale, il rimodellamento di membrana e la segnalazione dipendente dai fosfoinositidi. Nelle cellule di topo, MTMR2 contribuisce al controllo della dinamica delle vescicole e dell’organizzazione del citoscheletro, influenzando il turnover dei recettori e il trasporto intracellulare. Un’attività alterata di MTMR2 perturba l’omeostasi endo-lisosomiale e i programmi cellulari legati alla mielina, collegando le vie associate a MTMR2 a fenotipi di neuropatia periferica. Queste funzioni rendono Mtmr2 un nodo utile per studiare il metabolismo dei fosfoinositidi e il suo impatto sulle reti di traffico di membrana nei sistemi neurali e non neurali.

MTMR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mtmr2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MTMR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mtmr2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mtmr2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MTMR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mtmr2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MTMR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MTMR2 nelle cellule tumorali con espressione di Mtmr2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.