MTBP Plasmide Double Nickase (h): sc-404307-NIC

La proteina legante Mdm2 (MTBP) è un fattore nucleare implicato nel controllo dell’avvio della replicazione del DNA e della progressione della fase S attraverso interazioni con proteine della replicazione come Treslin/TICRR e CDC45, sostenendo l’attivazione delle origini e la stabilità del genoma. MTBP interagisce anche con le vie di segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare e della risposta allo stress, collegando le dinamiche della replicazione al controllo della proliferazione. Un’espressione disregolata di MTBP è stata associata a una tolleranza alterata allo stress replicativo e all’instabilità cromosomica osservate in diversi contesti tumorali, rendendolo un locus utile per lo studio dei percorsi che accoppiano la replicazione del DNA ai programmi di crescita oncogenica. L’analisi funzionale di MTBP chiarisce i meccanismi che governano la tempistica della replicazione, la segnalazione del danno al DNA e la fedeltà mitotica nelle cellule umane.

MTBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MTBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MTBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MTBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MTBP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.