MT-MMP-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401028-LAC

Il gene umano MMP14 codifica MT-MMP-1 (nota anche come MT1-MMP), una metalloproteinasi di matrice ancorata alla membrana che si localizza sulla superficie cellulare e promuove il rimodellamento pericellulare della matrice extracellulare. MT-MMP-1 degrada direttamente i collagenei interstiziali e attiva la pro-MMP2, coordinando cascate proteolitiche che influenzano la migrazione e l’invasione cellulare, nonché la morfogenesi tissutale. Accoppiando la proteolisi con la segnalazione mediata dalle integrine, la dinamica del citoscheletro e la biodisponibilità dei fattori di crescita, l’attività di MMP14 modella processi quali l’angiogenesi, la transizione epitelio-mesenchimale e la riparazione delle ferite. Un’espressione o un’attività deregolata di MMP14 è associata al rimodellamento patologico della matrice osservato in ambito oncologico, nella fibrosi e nel danno tissutale infiammatorio, rendendolo un nodo chiave nella ricerca focalizzata sul microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale MT-MMP-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MMP14 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MT-MMP-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MMP14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MT-MMP-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MMP14 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.