MMP-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400727-ACT

Il gene umano **MMP3** codifica la **metalloproteinasi della matrice-3** (MMP-3, stromelisin-1), un’endopeptidasi secreta zinco-dipendente che rimodella la matrice extracellulare scindendo proteoglicani, fibronectina, laminina e altri componenti della matrice. MMP-3 può inoltre attivare altri zimogeni di MMP, amplificando cascate proteolitiche che influenzano la migrazione cellulare, la riparazione tissutale, l’angiogenesi e la segnalazione infiammatoria nel microambiente extracellulare. La sua espressione è regolata a valle di vie sensibili a citochine e fattori di crescita, incluse le componenti NF-κB e AP-1/MAPK, collegando il turnover della matrice agli stati di attivazione immunitaria e stromale. Un’attività deregolata di MMP3 è stata associata al rimodellamento patologico della matrice osservato in artrite, malattie cardiovascolari, fibrosi e biologia dell’invasione tumorale, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico nella ricerca incentrata sul microambiente.

MMP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MMP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MMP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MMP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMP-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MMP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMP-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMP-3 nelle cellule tumorali con espressione di MMP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.