MLH1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421660-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLH1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MLH1 Double Nickase Plasmid (m) e il MLH1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mlh1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MLH1 Antibody (B-12): sc-271978
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLH1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MLH1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mlh1 codifica MLH1, un componente fondamentale del sistema di riparazione degli errori di appaiamento del DNA (MMR), che tutela l’integrità del genoma correggendo mismatches base–base e loop di inserzione–delezione che insorgono durante la replicazione del DNA. MLH1 agisce all’interno dei complessi MutL, coordinandosi con gli omologhi di MutS per collegare il riconoscimento dell’errore all’escissione e alla risintesi, e partecipa anche alla segnalazione del danno al DNA e alla processazione degli intermedi della ricombinazione. Nelle cellule di topo, una compromissione dell’attività di MLH1 aumenta la mutagenesi associata alla replicazione e l’instabilità dei microsatelliti, collegando i difetti del MMR a fenotipi di instabilità genomica ampiamente utilizzati in biologia del cancro e nella ricerca sulla riparazione del DNA. Di conseguenza, Mlh1 è spesso studiato nei percorsi che regolano l’accumulo di mutazioni, le risposte dei checkpoint e il mantenimento del genoma.
MLH1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mlh1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mlh1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mlh1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mlh1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.