mitochondrial ferritin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426664

Panoramica

Ftmt codifica la ferritina mitocondriale, una proteina di accumulo del ferro localizzata nella matrice mitocondriale che aiuta a tamponare il ferro labile e a limitare i danni ossidativi ferro-dipendenti. Sequestrando il ferro ferroso e influenzando il metabolismo dell’eme e dei cluster ferro-zolfo, Ftmt contribuisce all’omeostasi redox mitocondriale, alla funzione respiratoria e alle risposte cellulari allo stress ossidativo. Un’alterata gestione del ferro mitocondriale è implicata in vie correlate alla ferroptosi, alla neurodegenerazione, alle miopatie e ad altri disturbi caratterizzati da disfunzione mitocondriale e squilibrio delle specie reattive dell’ossigeno. Nei modelli murini, Ftmt viene utilizzato per studiare il traffico del ferro specifico per tessuto, il controllo di qualità mitocondriale e l’adattamento allo stress nei sistemi metabolici e neuronali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ftmt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ftmt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ftmt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mitochondrial ferritin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ftmt per lo studio della segnalazione di mitochondrial ferritin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ftmt critici per la funzione di mitochondrial ferritin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ftmt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ftmt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mitochondrial ferritin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR mitochondrial ferritin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ftmt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ftmt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.