Midnolin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425598

Panoramica

Midn (midnolin) codifica una proteina associata al nucleolo, implicata nella regolazione di programmi trascrizionali e della proteostasi, con collegamenti riportati alla differenziazione neuronale e alle risposte cellulari allo stress. Si ritiene che la midnolina partecipi a processi nucleari che influenzano la biogenesi dei ribosomi e il controllo di qualità delle proteine, in linea con il suo arricchimento nei compartimenti nucleolari e nucleari. Un’espressione alterata di MIDN è stata associata a fenotipi neurobiologici ed è stata esplorata nel contesto della funzione dei neuroni dopaminergici e di vie rilevanti per la neurodegenerazione. Nei modelli murini, Midn rappresenta un nodo sperimentalmente maneggevole per analizzare come la segnalazione nucleolare si interfacci con la regolazione genica nello sviluppo e nell’adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Midnolin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Midn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Midn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Midn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Midnolin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Midn per lo studio della segnalazione di Midnolin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Midn critici per la funzione di Midnolin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Midn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Midnolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Midnolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Midn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Midnolin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Midnolin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Midn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Midn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.