mGluR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403054-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mGluR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- mGluR-2 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal mGluR-2 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal mGluR-2 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di GRM2. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mGluR-2 Antibody (A-7): sc-271655
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mGluR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-403054-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
mGluR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h2) | sc-403054-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
GRM2 codifica il recettore metabotropico del glutammato umano 2 (mGluR-2), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula la trasmissione sinaptica sopprimendo l’attività dell’adenilato ciclasi, riducendo il cAMP intracellulare e regolando la conduttanza dei canali ionici. mGluR-2 funziona come autorecettore e eterorecettore presinaptico per limitare il rilascio di glutammato e modulare l’eccitabilità neuronale all’interno dei circuiti glutammatergici. Attraverso i processi di segnalazione dipendenti da cAMP/PKA, MAPK/ERK e dal calcio, GRM2 influenza la plasticità sinaptica, l’equilibrio dei neurotrasmettitori e le oscillazioni di rete. Un’alterata segnalazione di GRM2 è stata implicata nella biologia di disturbi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, supportandone l’impiego in studi meccanicistici delle disfunzioni a livello di circuito.
mGluR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GRM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
mGluR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GRM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GRM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di mGluR-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GRM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da mGluR-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via mGluR-2 nelle cellule tumorali con espressione di GRM2 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.