Meis1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401481

Panoramica

MEIS1 codifica Meis1, un fattore di trascrizione homeobox della famiglia TALE che coopera con le proteine HOX e PBX per controllare programmi di espressione genica che regolano il patterning embrionale, la differenziazione ematopoietica e l’impegno del destino cellulare. Meis1 influenza reti trascrizionali associate alla cromatina coinvolte nella proliferazione, nella specificazione di linea e nel mantenimento di cellule staminali/progenitrici, con ruoli dipendenti dal contesto nei diversi tessuti. Alterazioni della regolazione di MEIS1 sono state collegate a un’ematopoiesi disregolata e a circuiti trascrizionali oncogenici nella leucemia, e studi di associazione genetica implicano MEIS1 in tratti legati alla neurobiologia, come la sindrome delle gambe senza riposo. In quanto regolatore nucleare, MEIS1 è ampiamente utilizzato come modello per studiare le reti di regolazione genica dello sviluppo e la cooperatività tra fattori di trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Meis1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MEIS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MEIS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MEIS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Meis1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MEIS1 per lo studio della segnalazione di Meis1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MEIS1 critici per la funzione di Meis1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MEIS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Meis1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Meis1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MEIS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Meis1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Meis1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MEIS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MEIS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.