Med6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403204

Panoramica

MED6 codifica Med6, una subunità essenziale del complesso Mediator che collega i fattori di trascrizione specifici di sequenza con l’RNA polimerasi II per coordinare l’avvio della trascrizione e la responsività dei promotori. Supportando l’assemblaggio e la stabilità del macchinario di pre-inizio, Med6 contribuisce alla regolazione dei programmi di espressione genica che definiscono lo stato cellulare, incluse le vie che controllano proliferazione, differenziamento e trascrizione adattativa allo stress. Un’alterata funzione di Mediator può rimodellare gli output trascrizionali globali ed è spesso studiata nel contesto della segnalazione oncogenica, della disregolazione dello sviluppo e dell’instabilità genomica legata alla trascrizione. La perturbazione di MED6 fornisce quindi un punto di accesso gestibile per analizzare come la trascrizione dipendente da Mediator integri gli input di segnalazione nella cromatina e nell’attività dell’RNA polimerasi II nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Med6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Med6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED6 per lo studio della segnalazione di Med6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED6 critici per la funzione di Med6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Med6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Med6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Med6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Med6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.