MDHC Plasmide Double Nickase (h): sc-416827-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MDHC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MDHC Double Nickase Plasmid (h) e il MDHC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MDH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MDHC Antibody (H-6): sc-166879
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MDHC Plasmide Double Nickase (h) | sc-416827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDHC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MDH1 codifica la malato deidrogenasi citosolica (MDHC), un enzima NAD+/NADH‑dipendente che interconverte malato e ossalacetato, collegando il flusso di carbonio derivato dalla glicolisi al ciclo dell’acido tricarbossilico tramite la navetta malato‑aspartato. Sostenendo l’equilibrio redox citosolico e il trasferimento di NADH nei mitocondri, la MDHC contribuisce a coordinare il metabolismo energetico, l’anaplerosi e la disponibilità di precursori biosintetici. L’attività di MDH1 è strettamente connessa alle risposte cellulari allo stato nutrizionale e allo stress ossidativo attraverso la regolazione dei rapporti citosolici NADH/NAD+. Alterazioni dell’espressione di MDH1 o un riorientamento metabolico che coinvolge il ciclo malato/ossalacetato sono stati osservati in contesti di patologie metaboliche e proliferative, incentivando studi meccanicistici in modelli cellulari umani.
MDHC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MDH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MDH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MDH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MDH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.