Plasmide CRISPR d'Activation (h) MC3-R: sc-403341-ACT

MC3R code le récepteur de la mélanocortine‑3 (MC3‑R), un récepteur couplé aux protéines G qui répond aux peptides mélanocortines afin de réguler l’homéostasie énergétique, la répartition des nutriments et la signalisation neuroendocrinienne. Après liaison du ligand, MC3‑R se couple principalement à Gs, ce qui augmente l’AMPc et active des programmes transcriptionnels dépendants de PKA/CREB, avec des effets en aval sur les circuits hypothalamiques et le métabolisme périphérique. L’activité de MC3R est liée à des voies intégrant l’appétit, les rythmes circadiens et les comportements liés à la prise alimentaire, ainsi que des signaux inflammatoires au sein des tissus métaboliques. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de MC3R ont été associées à des phénotypes de régulation du poids corporel et à des dysfonctionnements métaboliques, ce qui souligne son intérêt dans les études sur la biologie de l’obésité et les traits cardiométaboliques associés.

MC3-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MC3R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MC3-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MC3R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MC3R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MC3-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MC3R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MC3-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MC3-R dans les cellules tumorales présentant une expression de MC3R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.