MARCH1 Plasmide Double Nickase (m): sc-428465-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARCH1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MARCH1 Double Nickase Plasmid (m) e il MARCH1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira March1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARCH1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428465-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse MARCH1 (membrane associated ring-CH-type finger 1) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che si localizza nei compartimenti endosomiali e della membrana plasmatica e regola la segnalazione immunitaria controllando l’ubiquitinazione e il traffico di proteine di superficie chiave. MARCH1 promuove l’internalizzazione e la degradazione di molecole coinvolte nella presentazione dell’antigene, come l’MHC di classe II, e della molecola co-stimolatoria CD86, plasmando l’attivazione delle cellule dendritiche e delle cellule B, la tolleranza periferica e le risposte infiammatorie. Attraverso lo smistamento dipendente dall’ubiquitina e il turnover lisosomiale, MARCH1 collega l’omeostasi delle proteine di membrana con vie che regolano endocitosi, trasporto vescicolare e immunità adattativa. Un’attività di MARCH1 deregolata è stata implicata in alterazioni della presentazione dell’antigene e dell’omeostasi immunitaria, a supporto del suo studio in modelli di autoimmunità, infezione e interazioni tra tumori e sistema immunitario.
MARCH1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus March1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di March1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di March1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con March1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.