MagT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404484-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MagT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MagT1 Double Nickase Plasmid (h) e il MagT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MAGT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MagT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404484-NIC | 20 µg | $410.00 |
MAGT1 codifica MagT1, una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico con ruoli nell’omeostasi del magnesio e nella glicosilazione N-linked come subunità del complesso oligosaccariltransferasi. Sostenendo la glicosilazione co-traduzionale delle proteine e il controllo qualità, MagT1 influenza la proteostasi della via secretoria e l’espressione in superficie di specifici recettori immunitari. La disfunzione di MAGT1 è stata associata a fenotipi di immunodeficienza con segnalazione linfocitaria alterata e suscettibilità a risposte cellulari allo stress deregolate, rendendolo rilevante per studi di biologia delle cellule immunitarie e delle vie associate al RE. Nei sistemi umani, la perturbazione di MAGT1 viene quindi utilizzata per indagare la maturazione delle glicoproteine, la segnalazione dipendente dagli ioni e gli effetti a valle sul traffico dei recettori.
MagT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAGT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAGT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAGT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAGT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.