LTK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421486

Descripción general

El gen Ltk de ratón codifica la tirosina quinasa de leucocitos (LTK), una tirosina quinasa receptora que regula la transducción de señales que controlan el crecimiento, la supervivencia y la diferenciación celular. La autofosforilación de LTK puede activar cascadas de quinasas aguas abajo, incluidas las vías MAPK/ERK y la señalización asociada a PI3K/AKT, influyendo en la proliferación celular y en programas de respuesta al estrés. En contextos del sistema inmunitario y del sistema nervioso, LTK se ha vinculado con la especificación de linajes y la maduración funcional, lo que la hace relevante para estudiar la comunicación cruzada entre redes de tirosina quinasas receptoras y la señalización del desarrollo. La señalización desregulada de RTK, incluidas alteraciones en la actividad de LTK, se examina con frecuencia en modelos de proliferación anómala y transformación, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de circuitos de señalización asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LTK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ltk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ltk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ltk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LTK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ltk para la investigación de la señalización de LTK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ltk críticos para la función de LTK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ltk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LTK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LTK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ltk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LTK (m) y el plásmido HDR LTK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ltk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ltk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.