LTK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421486

Panoramica

Mouse Ltk codifica la leucocita tirosin-chinasi (LTK), una tirosin-chinasi recettoriale che regola la trasduzione del segnale controllando crescita, sopravvivenza e differenziamento cellulari. L’autofosforilazione di LTK può attivare cascate chinasi a valle, incluse le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando la proliferazione cellulare e i programmi di risposta allo stress. In ambito immunitario e del sistema nervoso, LTK è stata associata alla specificazione di linea e alla maturazione funzionale, risultando quindi rilevante per studiare il crosstalk tra reti di tirosin-chinasi recettoriali e la segnalazione nello sviluppo. La segnalazione RTK deregolata, incluse alterazioni dell’attività di LTK, è spesso analizzata in modelli di proliferazione aberrante e trasformazione, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici dei circuiti di segnalazione associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LTK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ltk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ltk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ltk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LTK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ltk per lo studio della segnalazione di LTK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ltk critici per la funzione di LTK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ltk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ltk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LTK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LTK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ltk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ltk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.