LRSAM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407099

Panoramica

LRSAM1 (leucine rich repeat and sterile alpha motif containing 1) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING citosolica, che contribuisce al controllo di qualità delle proteine dipendente dall’ubiquitina e al traffico endosomiale attraverso interazioni con TSG101 e altri componenti del macchinario ESCRT. Regolando l’ubiquitinazione e il turnover di specifici substrati, LRSAM1 influenza lo smistamento intracellulare, la dinamica delle membrane e l’omeostasi neuronale. L’alterazione della funzione di LRSAM1 è stata collegata a neuropatie periferiche, inclusa la malattia di Charcot–Marie–Tooth di tipo 2P, evidenziandone la rilevanza per il mantenimento assonale e le vie di proteostasi. LRSAM1 è quindi di interesse per studi sulla segnalazione dell’ubiquitina, sul traffico vescicolare e sulle risposte cellulari allo stress associate alla neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRSAM1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LRSAM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LRSAM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LRSAM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRSAM1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LRSAM1 per lo studio della segnalazione di LRSAM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LRSAM1 critici per la funzione di LRSAM1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LRSAM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRSAM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRSAM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LRSAM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRSAM1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRSAM1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LRSAM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LRSAM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.