LRRC8D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406426

Panoramica

LRRC8D codifica una subunità contenente ripetizioni ricche di leucina del canale anionico regolato dal volume (VRAC), un complesso eteromerico che media il flusso di anioni attivato dal rigonfiamento e contribuisce all’omeostasi del volume cellulare. Gli assemblaggi di VRAC contenenti LRRC8D influenzano il trasporto di osmòliti e piccoli anioni e possono modulare l’equilibrio redox e le risposte cellulari allo stress, intersecandosi con processi quali proliferazione, apoptosi e segnalazione infiammatoria. Nei tessuti immunitari e di barriera, la composizione del VRAC, inclusa LRRC8D, è stata collegata alla regolazione della gestione delle specie reattive dell’ossigeno e di output di segnalazione dipendenti dallo stimolo. L’attività di VRAC deregolata e i pattern alterati di espressione delle subunità LRRC8 sono stati studiati in contesti che includono la biologia del cancro, lo stress metabolico e la fisiopatologia immuno-mediata, in cui le vie di trasporto ionico e di stress ossidativo vengono spesso rimodellate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC8D (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LRRC8D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LRRC8D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LRRC8D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRRC8D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LRRC8D per lo studio della segnalazione di LRRC8D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LRRC8D critici per la funzione di LRRC8D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LRRC8D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRRC8D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRRC8D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LRRC8D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRRC8D Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRRC8D (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LRRC8D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LRRC8D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.