LIMK-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401296-NIC

Il gene umano **LIMK2** codifica la chinasi 2 del dominio LIM (LIMK-2), una chinasi serina/treonina che fosforila e inattiva la cofilina per regolare il turnover dei filamenti di actina. Attraverso la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho tramite ROCK e PAK, LIMK-2 coordina le dinamiche del citoscheletro alla base del controllo della forma cellulare, dell’adesione, della migrazione e della citocinesi. L’attività di LIMK2 contribuisce a vie di segnalazione collegate alla transizione epitelio-mesenchimale, alla meccano-trasduzione e alla struttura sinaptica, e la disregolazione del rimodellamento dell’actina è associata a comportamento invasivo e a fenotipi di rimodellamento tissutale anomalo. Alterazioni della segnalazione di LIMK2 sono state studiate in contesti che includono la motilità delle cellule tumorali e programmi legati alla metastasi, processi neurodegenerativi che coinvolgono la dinamica delle spine dendritiche e il rimodellamento fibrotico in cui la contrattilità actina–miosina risulta perturbata.

LIMK-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIMK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIMK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIMK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIMK2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.