leupaxin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430706

Panoramica

Il gene murino *Lpxn* codifica la leupaxina, un adattatore delle adesioni focali contenente domini LIM che si associa a complessi legati alle integrine e a proteine che regolano l’actina per coordinare il rimodellamento del citoscheletro. La leupaxina partecipa a vie di segnalazione dipendenti dall’adesione che coinvolgono la focal adhesion kinase (FAK) e le chinasi della famiglia Src, influenzando l’espansione cellulare, la migrazione e la meccanotrasduzione. In contesti immunitari e mesenchimali, può modulare programmi trascrizionali attraverso interazioni con recettori nucleari e altri co-regolatori. Una segnalazione alterata delle adesioni focali e una variazione dell’espressione della leupaxina sono state collegate a comportamenti cellulari invasivi e alla dinamica del microambiente infiammatorio, a sostegno della sua rilevanza negli studi di biologia del cancro e del traffico delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO leupaxin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lpxn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lpxn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lpxn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina leupaxin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lpxn per lo studio della segnalazione di leupaxin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lpxn critici per la funzione di leupaxin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lpxn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal leupaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal leupaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lpxn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal leupaxin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR leupaxin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lpxn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lpxn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.