Lck Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421397

Panoramica

Lck (chinasi tirosinica proteica specifica dei linfociti) è una chinasi della famiglia Src che avvia la segnalazione del recettore dei linfociti T (TCR) fosforilando i motivi ITAM di CD3 e promuovendo il reclutamento e l’attivazione di ZAP70, con conseguente assemblaggio a valle del signalosoma LAT/SLP-76. Nelle cellule immunitarie murine, Lck regola gli eventi di segnalazione prossimali che collegano il riconoscimento dell’antigene al flusso di calcio, all’attivazione delle MAPK e a programmi trascrizionali controllati da NFAT, NF-κB e AP-1, influenzando lo sviluppo dei timociti e l’attivazione dei linfociti T periferici. L’attività di Lck è integrata con la segnalazione dei corecettori (CD4/CD8) ed è modulata da un meccanismo dipendente dalla fosforilazione che alterna conformazioni attive e inattive, rendendola centrale nel determinare le soglie di segnalazione nei linfociti. Vie dipendenti da Lck deregolate sono spesso utilizzate come modelli di attivazione immunitaria alterata, linfoproliferazione e segnalazione aberrante di chinasi tirosiniche in contesti ematopoietici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lck in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lck insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lck a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lck.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lck per lo studio della segnalazione di Lck, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lck critici per la funzione di Lck
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lck per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lck CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Lck CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lck. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lck Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Lck (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lck per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lck definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.