LCAT Plasmide Double Nickase (h): sc-405225-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LCAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LCAT Double Nickase Plasmid (h) e il LCAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LCAT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LCAT Antibody (D-2): sc-376682
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LCAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-405225-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LCAT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405225-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La LCAT umana (lecitina–colesterolo aciltransferasi) è un enzima secreto che catalizza l’esterificazione del colesterolo libero sulla superficie delle lipoproteine, generando esteri del colesterolo che favoriscono la maturazione delle HDL e il trasporto inverso del colesterolo. Rimodellando i fosfolipidi e regolando la composizione delle particelle lipoproteiche, LCAT influenza vie dell’omeostasi lipidica legate all’efflusso di colesterolo, alla funzione delle apolipoproteine e al traffico sistemico dei lipidi. Un’attività alterata di LCAT è associata a fenotipi di dislipidemia e a profili lipoproteici anomali, rendendola rilevante per studi meccanicistici della biologia del rischio cardiometabolico. Nei sistemi sperimentali, la perturbazione di LCAT viene utilizzata per analizzare le relazioni tra biogenesi delle HDL, gestione del colesterolo nei macrofagi e segnalazione infiammatoria guidata dai lipidi.
LCAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LCAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LCAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LCAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LCAT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.